HIV-1 p24 ELISA  檢測試劑盒說明書

貨號： HG-P001

產品簡介：

本品采用雙抗夾心法檢測樣本中 HIV-1 p24蛋白，將HIV-1 p24特異性單克隆抗體預包被在微孔板上，將標準品與待測樣本加入到已包被的反應孔內進行孵育。存在的 HIV-1 p24 蛋白會定量的與微孔板中的抗體結合，洗滌除去未結合物，加入生物i素標記的抗p24 抗體，最后加入親和素標記 HRP，形成抗體-抗原-生物i素抗體-酶標親和素復合物，通過TMB顯色程度指示樣品中蛋白含量。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑盒組分。
檢測范圍： 6.25 - 200 pg/mL
定  量  限： 6.25 pg/mL
檢  測  限： 3.125 pg/mL
精  密  度： CV%≤10%  RE%≤±15%

規格：

96T

應用：

適用于快速檢測任何基于HIV-1的慢病毒的p24蛋白含量測定。

試劑盒組成：

備 注:檢測抗體、酶結合物、標準品和 20% CS Buffer -20℃保存，其他組分 2~8℃避光保存，有效期 12 個月。

需自行準備的材料

◆酶標儀

◆去離子水

◆恒溫培養箱

◆全新濾紙

◆微量加液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

試劑配制

1.平衡：將所需試劑移到室溫（18~25℃）平衡30分鐘。
2.配液：
①1×PBST洗滌液：計算實驗所需工作液體積，取適量20×PBST洗液，用去離子水1：19稀釋稀釋，混勻后備用。
②檢測抗體及酶結合物工作液:計算實驗所需工作液體積，取適量生物i素抗體或酶潔合物用 20% CS Buffer1：99稀釋，充分混勻備用。
③準品及樣品使用樣品稀釋液進行稀釋。
3.標準品稀釋:標準品第一個中間梯度（Pre-1）-20°C可存放 1-7 天。

操作步驟

1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產生氣泡。
2.根據實驗孔數量，確定所需的板條數目，剩余板條放回含干燥劑的鋁箔袋，密封。
3. 加樣：每孔加入10uL 裂解液，再加入90uL 標準品、樣品稀釋工作液、陰性對照至相應孔中。用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養箱，200-300rpm，溫育60分鐘。
4. 洗滌：棄去各孔內液體，用1XPBST洗滌液注滿微孔（300μL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內液體；重復3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。
5. 加生物i素檢測抗體工作液：每孔加生物i素檢測抗體工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養箱，200-300rpm，溫育 60 分鐘。
6. 洗滌：棄去各孔內液體，用1XPBST洗滌液注滿微孔（300uL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內液體；重復3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
7. 加酶結合物工作液: 每孔加酶結合物工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養箱，200-300rpm，溫育 60分鐘。
8. 洗滌：棄去各孔內液體，用1XPBST洗滌液注滿微孔（300uL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內液體；重復3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
9. 顯色：每孔分別加底物顯色液A50uL，底物顯色液B50uL，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置 25℃避光顯色 10 分鐘。
10. 測定：每孔加終止液50uL，輕微混勻。選擇酶標儀主波長450nm，參考波長630nm，測定各孔吸光值（OD 值）。

結果處理

本產品建議采用四參數的擬合方式進行線性擬合及計算。
1. 標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）

2. 以標準品理論濃度與對應OD值進行四參數擬合，得到標準曲線（如下圖所示）

檢驗方法的局限性

本試劑僅用于檢測樣本中 P24 蛋白組分的含量。

注意事項

1. 若檢測具有極i高水平p24 蛋白的樣本。含有高水平 p24（即>200pg/mL）的樣品必須在測定前進行稀釋，以獲得準確的p24 值。這類樣本可能包括慢病毒上清，通常慢病毒粗毒液建議稀釋 5000-40000 倍，成品建議稀釋 40000-160000倍。首i次檢測建議進行至少3個連續倍數的稀釋，以在標準曲線范圍內產生至少一個稀釋后樣品。在進一步分析或稀釋前，需充分混合稀釋液。每份樣品重復分析兩次，以確定原始樣品中正確的 p24 值。
2. 試劑按標簽說明儲存，使用前室溫（18~25℃）平衡。
3. 預包被酶標板使用前，請平衡至室溫（18~25℃）再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其余不用試劑應包裝好或蓋好。
4. 標準品、生物i素及酶結合物體積量很小，使用前請短暫離心，以使管壁或管蓋的液體沉積到管底。
5. 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
6. 使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要。
7. 洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應孔中吸水。
8. 底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。
9. 本產品為一次性使用的試劑盒，請在效期內使用。

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